Electroforeza
- Definiţia metodei
- Descrierea metodei
Electroforeza-
metoda de laborator ce permite separarea în câmp electric a
diferitelor componente ale
unei
soluţii (separarea fracţiunilor proteice ale serului, care se
deplasează cu viteze diferite: albumina 50-60%, alfa 1 globulina
3-4%, alfa 2 globulina 9-11%, beta 12-14%, gama ) sau
imunoglobulinele cu proprietăţi imunitare: IgG, IgM, IgA, IgD,
IgE).15-18% Valori patologice:
- nefroza lipoidică (scad albuminele, cresc alfa 2)
- colagenoza (creşte gama)
- ciroza (scad albuminele, cresc beta şi gama)
- RAA, tuberculoza (creşte alfa 2)
În
prezent electroforeza reprezintă principala metodă de separare a
moleculelor în cadrul laboratoarelor de biologie celulară.
Termenul
de electroforeză descrie migrarea unei particule încărcate sub
influenţa unui câmp electric. Deoarece în câmp electric
moleculele se deplasează cu o viteză ce depinde de sarcina lor
electrică precum şi de formă sau mărimea lor, electroforeza a
fost dezvoltată pentru separea diferitelor molecule.
Electroforeza
este utilizată pentru analiza şi purificarea moleculelor foarte
mari cum sunt proteinele şi acizii nucleici, dar se aplică şi
altor molecule ca glucide, aminoacizi, peptide.
Denumirea
de electroforeză provine din asocierea cuvântului grec electron
(electric) cu cel latin phore (purtător), evidenţiindu-se astfel
rolul esenţial al câmpului electric în procedeul descris.
Electroforeza
este o metodă de analiză şi separare bazată, în principal pe
criterii de sarcină electrică şi masă moleculară. Migrarea
diferenţială a particulelor încărcate electric se face sub
acţiunea unui câmp electric continuu.
Electroforeza
proteinelor pe gel de agaroză este tehnica cea mai uşoară şi mai
puţin costisitoare, implicând o cantitate limitată de materiale,
un timp de lucru scurt şi o reproductibilitate foarte bună.
Separarea electroforetică a proteinelor serice prezintă un interes
major în testele clinice, datorită
1
importantelor
informaţii pe care le oferă acestea în diverse afecţiuni, precum
şi asupra modalităţilor de tratare a acestora.
Electroforeza
Proteinelor
Proteinele
pot fi separate şi purificate. Metodele de separare a proteinelor se
bazează pe proprietăţile acestora ( sarcină, mărime,
solubilitate ) care variază de la o proteină la alta.
Deoarece
multe proteine se lipesc de alte biomolecule, ele pot fi separate şi
în baza proprietăţilor de legare. Sursa proteinelor este în
general ţesutul sau celulele microbiene. Celula trebuie spartă şi
proteina trebuie eliberată într-o soluţie numită extract crud.
Cromatografia prin schimb de ioni poate fi folosită pentru a separa
proteinele cu sarcini diferite (similar aminoacizilor), aşa cum alte
metode cromatografice bazate pe alte proprietăţi pot fi folosite.
4
Prin
electroforeza hemoglobinei pot fi detectate fracţiuni normale sau
patologice, poziţia benzilor obţinute fiind comparată cu cea a
benzilor standard furnizate de materialul de control.
În
cazul hemoglobinelor anormale modificarea structurală duce la
modificarea sarcinii electrice, ceea ce permite migrarea şi
separarea lor electroforetică. Electroforeza de Hb folosind ca
suport de migrare gelul agar este o metodă rapidă şi sensibilă,
permiţând separarea Hb fiziologice şi patologice, inclusiv a
fracţiilor minore.
Electroforeze
orizontale - Aparate în gel de agaroza Electroforeze
verticale - Analiza proteinelor şi a aciziloe nucleici
